Острые респираторные инфекции являются обычными респираторными заболеваниями у детей, часто вызванных вирусами. Респираторный синцитиальный вирус (RSV) и респираторный аденовирус (ADV) являются двумя распространенными патогенными микроорганизмами, вызывающими острые респираторные инфекции у детей. Легкие случаи могут вызвать общие симптомы простуды, такие как кашель и насморк, в то время как тяжелые случаи могут вызывать тяжелые осложнения, такие как пневмония и среда отита. Согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения, обнаружение патогенных микроорганизмов должно быть быстрым, точным, чувствительным и конкретным и не должно полагаться на специализированных техников или крупных инструментов. Следовательно, особенно важно разработать метод обнаружения для RSV и ADV, который может соответствовать вышеуказанным требованиям обнаружения.
Исследовательская группа директора Ма Донгли из Института педиатрии детской больницы Шэньчжэнь опубликовала статью «Анализ амплификации мультиплексной рекомбиназы полимеразы в сочетании с CRISPR/ CAS12A для обнаружения респираторных синцитиальных вируса и аденовируса респираторных путей» в журнале «научные отчеты», с фактором воздействия 4.6.
Обзор исследований
Многоотермическая изотермическая быстрое усиление нуклеиновой кислоты MIRA объединяется с системой обнаружения CRISPR/CAS. Проектируя праймеры MIRA и CRISPR RNAS (CRRNAS), выполняя множественные сравнения последовательностей, оптимизацию условий реакции и использование устройств численного обнаружения флуоресценции для проверки чувствительности и специфичности.
И с использованием результатов QPCR в качестве контроля сравнения, была изучена согласованность результатов теста 160 клинических образцов мазки горла.
Экспериментальные результаты
1. Чувствительность и специфичность метода обнаружения MIRA-CRISPR/CAS12A
При обнаружении метода MIRA пара праймеров RSV-F1/R1 используется для амплификации нуклеиновых кислот из образцов мазки в горле RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, Flub, HMPV, FLUA или RSV/ADV, совместных пациентов. За исключением RSV и ADV, у которых были амплифицированные полосы, другие результаты были отрицательными, что указывает на то, что выбранные праймеры MIRA не перекрестно реагировали с другими восьми протестированными патогенами и были хорошо сохранились.
Впоследствии рекомбинантные плазмиды RSV и ADV разбавляли 10Times с использованием стерильной воды, а пределы обнаружения для RSV и ADV были 10.6копии/мл.
(1-10: Образцы мазки в горле от пациентов с RSV, совместной инфекцией RSV/ADS и других образцов дыхательного патогена соответственно)
2. Сравните с QPCR
По сравнению с методом QPCR пределы обнаружения RSV и ADV составляют 103 копии/мл
(Чувствительность обнаружения QPCR RSV и ADV)
Метод MIRA-CRISPR более подходит для массовых лабораторий, с коротким временем обнаружения, простой работой и отсутствием необходимости в крупномасштабных инструментах QPCR для выполнения экспериментальных операций.
3. Сравнение клинических образцов
Образцы мазки в горле были собраны у 160 детей с острыми респираторными инфекциями. В то же время для обнаружения использовались метод MIRA-CRISPR и метод QPCR, и результаты сравнивались с результатами клинических испытаний.
По сравнению с методом QPCR чувствительность метода MIRA-CRISPR для RSV и ADV составляла 98,1% и 91,4% соответственно, а специфичность обнаружения составила 1 0 0%. Значение каппа превышает 0,95, что указывает на высокую степень согласованности.
Метод MIRA-CRISPR имеет преимущества быстрого, чувствительного и специфического обнаружения RSV и ADV. Он может обнаружить вирусные инфекции быстро и точно и точно и более подходит для использования в районах со скудными медицинскими ресурсами.