Здесь мы создаем sCRAM (субоптимальный мотив соседства с протоспейсером (PAM)-опосредованный CRISPR РНК и нуклеазой Cas12a в сочетании с мультиферментной изотермической быстрой амплификацией), быструю и не требующую экстракции-диагностическую платформу, которая обнаруживает вирус АЧС в течение 20 минут. sCRAM объединяет стадию быстрого высвобождения нуклеиновой кислоты (40 градусов, 5 минут) с реакцией в одной-пробирке, сочетающей мультиферментную изотермическую амплификацию (MIRA) и субоптимальную PAM-опосредованную CRISPR/
Система Cas12a (37 градусов, 15 минут), позволяющая-визуально считывать данные без использования инструментов с помощью УФ-излучения или полосок бокового потока (LFS). sCRAM демонстрирует чувствительность к обнаружению единичных-копий и не проявляет перекрестной-реактивности с пятью распространенными патогенами свиней (PRRSV, PPV, JEV, PCV и PRV). Оценка 111 смоделированных и клинических образцов (включая кровь, плазму и мазки) выявила 100 % совпадение с qPCR для считывания УФ-излучения и 98,20 % для LFS.
считывание, причем оба метода демонстрируют 100 % специфичность. Простота, скорость и адаптируемость sCRAM подчеркивают ее потенциал для децентрализованного наблюдения за вирусом АЧС в условиях-ограниченных ресурсов, предлагая мощный инструмент для сдерживания вспышки.
В этом исследовании мы разработали sCRAM — платформу быстрого-развертывания в полевых условиях для обнаружения вируса АЧС, объединяющую субоптимальный PAM-опосредованный CRISPR/Cas12a с мультиферментной изотермической амплификацией. Анализ обеспечивает чувствительность к одной-копии 1 копия/мкл в течение 20 минут и не демонстрирует перекрестной-реактивности с основными патогенами свиней. Клиническая проверка образцов крови, плазмы и мазков продемонстрировала полное соответствие с результатами кПЦР с использованием считывания в УФ-свете и точностью 98,20 % с помощью тест-стрипов с боковым потоком. Благодаря упрощенному управлению, высокой чувствительности и специфичности, а также визуальной интерпретации результатов, sCRAM предлагает большой потенциал для -надзора за вирусом АЧС на месте и для более широких диагностических приложений-на местах-помощи.
