Йо! Я поставщик комплектов изотермической амплификации РНК, и сегодня я хочу поговорить о целесообразности использования этих наборов для амплификации РНК -клетки.
Во -первых, давайте поймем, что такое усиливание RNA Cell -Cell RNA. Одиночная секвенирование РНК -клетки (SCRNA - SEQ) стало игрой в биологическом исследовании. Это позволяет нам изучать паттерны экспрессии генов отдельных клеток, что очень важно, потому что клетки в ткани не совсем одинаковы. Там может быть много неоднородности, и SCRNA - SEQ помогает нам заглянуть в эти различия на уровне одноклеточных клеток. Но вот улов: количество РНК в одной ячейке очень крошечное. Мы говорим о уровнях пикограммы. И для большинства методов анализа нижестоящих направлений нам нужно гораздо большее количество РНК. Вот где появляется усиление.
Итак, как насчет того, чтобы использовать наши наборы из изотермической амплификации РНК для этой задачи? Что ж, давайте углубимся в плюсы и минусы.
Преимущества
1. Простота
Одним из самых больших преимуществ изотермического усиления является его простота. В отличие от традиционной ПЦР, которая требует, чтобы термоцикл проходил различные температурные циклы (денатурация, отжиг и удлинитель), изотермическая амплификация происходит при постоянной температуре. Это означает, что вам не нужен фантастический и дорогой термоцикл. Вы можете выполнить реакцию усиления в простом тепловом блоке или даже в водяной бане. Для исследователей, которые занимаются усилением RNA -клеточной РНК с бюджетом или в менее оснащенной лаборатории, это огромный плюс.
2. Скорость
Изотермическое усиление обычно довольно быстро. Он может генерировать большое количество амплифицированной РНК в течение относительно короткого периода. Когда вы имеете дело с одноразовыми образцами клеток, время имеет значение. Вы не хотите ждать часами, чтобы усилить. НашMira RNA изотермическая набор быстрого амплификации Basic - IIпредназначен для того, чтобы дать вам быстрые результаты, поэтому вы можете перейти к следующему этапу вашего эксперимента, не тратя слишком много времени.
3. Чувствительность
Эти наборы очень чувствительны. Они могут обнаружить и усиливать даже транскрипты РНК с низким содержанием численности в отдельных клетках. В одноклеточном анализе часто бывают редкие транскрипты, которые имеют решающее значение для понимания функции и развития клеток. Наши изотермические наборы усиления могут забрать эти редкие транскрипты и усилить их, позволяя вам получить более полное представление о профиле экспрессии генов в одной ячейке.
4. Совместимость
Изотермическая амплификация совместима с широким диапазоном нисходящих приложений. Независимо от того, хотите ли вы сделать секвенирование РНК, QPCR или другие методы анализа, может использоваться амплифицированная РНК из наших наборов. Эта гибкость великолепна, потому что она позволяет вам выбрать метод анализа, который лучше всего подходит для вашего исследования.
Недостатки
1. Предвзятость
Одним из основных недостатков любого метода амплификации является смещение. Изотермическое усиление не является исключением. Различные транскрипты РНК могут быть амплифицированы с разными скоростями, что может привести к неточному представлению исходной популяции РНК в одной клетке. Это смещение может повлиять на результаты анализа нижнего течения, что затрудняет точную количественную оценку уровней экспрессии генов. Тем не менее, наша команда R & D усердно работала, чтобы минимизировать этот предвзятость в нашихMira RNA изотермическая набор для быстрого амплификации.Полем Мы оптимизировали условия реакции и формулировки ферментов, чтобы сделать усиление как можно более беспристрастным.
2. Риск загрязнения
Поскольку изотермическая амплификация может генерировать большое количество усиленного продукта, существует более высокий риск загрязнения. Даже крошечное количество загрязняющей РНК или ДНК может быть усилено и отображаться в ваших результатах. Это может привести к ложным позитивам и неточным данным. Чтобы снизить этот риск, важно следовать строгим лабораторным протоколам, таким как использование выделенных пипетков, работа в чистом капюшоне и использование правильных методов дезактивации.
Осуществимость в различных сценариях исследования
1. Биология развития
В биологии развития понимание того, как клетки дифференцируются и развиваются, имеет решающее значение. Усиление РНК с одной - клеточной РНК может помочь исследователям идентифицировать ключевые гены и сигнальные пути, участвующие в этих процессах. Наши комплекты изотермической амплификации РНК могут быть очень полезны здесь. Например, при изучении раннего развития эмбриона одноразовый анализ может выявить изменения экспрессии генов, которые происходят, когда клетки начинают специализироваться. Простота и скорость наших наборов позволяют исследователям быстро усилить РНК из этих драгоценных образцов одноразовых ячейков и начать анализ данных.
2. РАСКОВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Рак является сложным заболеванием, а одноразовый анализ РНК может дать представление о гетерогенности опухолевых клеток. Различные клетки в опухоли могут иметь разные профили экспрессии генов, которые могут влиять на их поведение, такие как метастазирование и лекарственная устойчивость. Наши наборы могут быть использованы для амплификации РНК из отдельных раковых клеток, что позволяет исследователям изучать эти различия на молекулярном уровне. Высокая чувствительность наших наборов может обнаружить редкие транскрипты, которые могут быть связаны с прогрессированием рака или реакцией на лекарство.
3. Иммунология
В иммунологии анализ одноклеточной РНК может помочь понять функцию различных подмножествам иммунных клеток. Например, Т -клетки могут иметь разные подтипы, каждый с уникальной паттерной экспрессии генов. Наши комплекты изотермической амплификации РНК могут быть использованы для амплификации РНК из отдельных Т -клеток, позволяя исследователям изучать изменения экспрессии генов, которые происходят во время иммунного ответа.
Контроль качества
При использовании наших комплектов из изотермической амплификации РНК для амплификации РНК с одной -клеточной РНК необходим контроль качества. Вы всегда должны запускать отрицательный контроль, чтобы проверить загрязнение. Кроме того, это хорошая идея использовать Spike - в контроле РНК. Это известные последовательности РНК, которые вы добавляете в свои образцы одноразовых клеток в известной концентрации. Сравнивая результаты амплификации Spike - в контроле с фактической РНК с одной ячейкой, вы можете оценить эффективность и смещение реакции усиления.
Кроме того, вы можете использовать гель -электрофорез или капиллярный электрофорез для проверки распределения по размеру амплифицированной РНК. Хороший результат усиления должен показывать относительно широкий диапазон размеров РНК, что указывает на то, что различные транскрипты были усилены.
Заключение
В заключение, использование наших наборов из изотермической амплификации РНК для амплификации РНК -клетки, безусловно, возможно. Хотя есть некоторые проблемы, такие как предвзятость и риск загрязнения, преимущества простоты, скорости, чувствительности и совместимости делают их отличным вариантом для многих сценариев исследования. Независимо от того, находитесь ли вы в базовой исследовательской лаборатории или в клинических исследованиях, наши наборы могут помочь вам получить максимальную отдачу от ваших одноразовых образцов РНК.
Если вы заинтересованы в том, чтобы узнать больше о наших комплектах изотермической амплификации РНК или у вас есть какие -либо вопросы об использовании их для усиления РНК -клеточной РНК, не стесняйтесь обратиться. Мы всегда рады поговорить и помочь вам с вашими исследованиями. И если вы готовы совершить покупку, мы здесь, чтобы облегчить процесс закупок. Вы можете исследовать наш ассортимент продукции, включаяMIRA ДНК Изотермическая набор быстрого усиления, на нашем веб -сайте и начните свое путешествие по одноклеточному анализу РНК.
Ссылки
- Tang, F., Barbacioru, C., Wang, Y., Nordman, E., Lee, C., Xu, N.,… & Surani, MA (2009). МРНК - SEQ ЦЕЛЕСКОЙ - Транскриптомный анализ одной клетки. Методы природы, 6 (5), 377 - 382.
- Ван Дейк, Д.Ф., Нанис Дж., Го, Г., Шарма Р., Ходосевич К., Адонис, Х., ... и Ван Уденаарден А. (2018). Десять лет секвенирования RNNA одноклеточной RNNA. Природная связь, 9 (1), 1 -
- Chen, F. & Macosko, EZ (2019). Одиночные технологии секвенирования РНК и биоинформатики. Природные протоколы, 14 (4), 1 202 - 1 226.